Determinarea OMG din Soia

Alimentele continand sau constand din organisme modificate genetic (OMG-uri) sunt cunoscute, in mod generic ca alimente MG.

OMG-urile sunt bacterii, plante sau animale a caror structura genetica a fost modificata prin intermediul tehnologiei genetice.Alimentele obtinute din plante MG nu sunt intotdeauna alimente MG.

De exemplu, ulei din soia MG este identic cu el din soia traditionala.Reglementarile europene reclama si etichetarea acestor alimente pentru informarea consumatorilor.

Prima reactie a consumatorilor in ceea ce priveste alimentele MG a fost aceea de respingere, dar in ciuda acestei manifestari multi oameni de stiinta din cercetare si industrie au considerat utilizarea proceselor biotehnologice , in special modificarea geneica , ca foarte importanta in gasirea de noi solutii de cresterea a productiei alimentare, imbunatatind continutul nutritiv ai asigurarea a mai bunor caracteristici de procesare sau de stocare a alimentelor.

Analiza prezentata in continuare a avut ca prim pas recoltarea de probe dintr-un lot de seminte.

Aceasta etapa reprezinta o procedura alcatuita din mai multe trepte ce reduc un lot mare, la mai multe cantitati de material mult mai mici, probe analitice, ce vor fi analizate în laborator. Pentru aceasta se recolteaza o cantitate de seminte (colectata simultan din acelasi loc din lot) aceasta operatie se efectueaza în mai multe locuri din lot, dupa un plan specific si amestecate, obtinându-se un bulk.

O fractie din bulk - proba de laborator, este trimisa la laborator unde este macinata pana la obtinerea unei pudre fine.

O portie din proba de laborator (pudra) urmeaza procesul analitic dupa ce este împartita în monstre analitice ce pot fi analizate în totalitate în reactia test.

Obiectivele acestui proces lung si complex de obtinere de monstre analitice (probe) este clar: obtinerea unei monstre finale de o marime disponibila lucrului si sa reprezinte exact lotul.

Prepararea probelor este critica pentru metoda de detectare si /sau cuantificare OMG, bazata pe ADN sau proteine, iar existenta materialelor de referinta certificate (Certified Reference Materials) constituie o cerinta fundamentala pentru fiecare metoda de detectie.

Un alt pas critic pentru metodele de detectare a OMG/non- OMG, este reprezentat de omogenizarea probelor.

De asemenea, optimizarea extractiei de ADN este fundamentala pentru asigurarea de ADN. Acest aspect este de o importanta particulara în cazul majoritatii produselor alimentare din magazine, obtinute prin procesarea boabelor de soia si porumb. Este bine cunoscut ca ADN poate fi degradat în timpul procesarii.

MODUL DE LUCRU:

Extractia ADN s-a efectuat conform protocolului pe baza de CTAB, o adaptare a metodei de laborator de la Laboratorul OMG al Institutului pentru Sanatatea si Protectia Consumatorilor de la Centrul de Cercetari Comune JRC- Ispra- Italia, al Uniunii Europene.

Materialul se omogenizeaza bine (unde este cazul se macina), la 1 gram de omogenizat se adauga 7,5 ml tampon de extractie (2% CTAB, 1,4 mM NaCl, 0,1 M Na2-EDTA) 200µl Proteinaza K (20 mg/ml) si RN-aza 100 ¼l (10mg/ml) incubare la 65ºC, doua ore, centrifugare 5 minute, la 3000 rpm., se recupereaza 800µl supernatant si se trateaza cu 1 volume cloroform - alcool isoamilic, de doua ori, centrifugare la 13000 rpm, 10 min.

Se recupereaza supernatantul si se adauga 2 volume de tampon de precipitare cu CTAB, incubare la temperatura camerei 60 min., centrifugare 5 min., la 13000 rpm. Supernatantul se decanteaza si se adauga 350 ¼l NaCl 1,2M si 350 ¼l amestec cloroform-alcool isoamilic, centrifugare 10 min. la 13000 rpm, supernatantul se recupereaza si se aduga 0,6 volume de isopropanol, centrifugare 10 min. la 13000 rpm; se decanteaza supernatantul si ADN se spala cu etanol 70%, ADN se usuca si apoi se dizolva în apa ultrapura (MiliQ-