Microbiologia cerealelor, a pâinii și laboratorul microbiologic

CAPITOLUL I:

Laboratorul de microbiologie si echipamentul microbiologic

Laboratorul de microbiologie este considerat prima linie de detectare a evenimentelor neobisnuite, de natura infectioasa. Circulatia datelor catre autoritatile nationala si internationale este realizata prin utilizarea strategiilor de supraveghere pasiva si activa.

OMS a clasificat microorganismele in 4 grupe de risc infectios. De asemenea, OMS a clasificat laboratoarele de microbiologie in 4 niveluri, in functie de gradul de protectie necesar pentru personal, mediul inconjurator si comunitate:

- nivele I si II – laboratoare de baza,

- nivel III – nivel restrictiv,

- nivel IV – laborator de maxima restrictie.

Limitarea bioriscului consta in asigurarea barierelor antiinfectioase, primare si secundare. Regulile de siguranta microbiologica si antiepidemica impun ca laboratoarele de microbiologie sa functioneze in circuit cu sens unic. Echipamentul individual de protectie este obligatoriu pentru personal, iar activitatea trebuie sa se desfasoare in boxe de siguranta antiepidemica. Dotarea tehnica obligatorie a laboratoarelor de microbiologie include aparatura de sterilizare, iar controlul eficientei sterilizarii trebuie efectuat periodic prin teste chimice si biologice.

Laboratorul de microbiologie trebuie să cuprindă două compartimente:

- o sală de pregătire a mediilor şi obiectelor de lucru şi de decontaminare, conţinând mese, un autoclav, o etuvă, un congelator şi un frigider (care va fi utilizat şi pentru păstrarea tulpinilor microbiene). Tot aici se poate stoca sticlăria, mediile de cultură precum şi reactivii.

- o sală de lucrări propriu-zise, de manipulare a culturilor microbiene, la adăpost de curenţii de aer, dotată cu mese cu suprafaţă netedă, rezistentă, impermeabilă, cu conducte de gaz şi prize electrice, un sistem de vid şi de aer comprimat şi o hotă sterilizabilă, cu radiaţii ultraviolete (eventual o hotă cu flux laminar). În măsura în care este posibil, în legătură cu această sală, ar trebui să existe anexe prevăzute cu termostate la diferite temperaturi ( 250C, 300C, 370C, 440C, 550C).

Manipulările de culturi microbiene sau de produse susceptibile să conţină microorganisme se efectuează ţinând cont de unele tehnici particulare prin care să se evite cele două tipuri de contaminare:

1. contaminarea culturii sau a produsului ce trebuie analizat datorită personalului sau mediului inconjurător;

2. contaminarea personalului sau a mediului înconjurător de către microorganismele studiate.

In laboratorul de microbiologie, operaţia de bază este transferul de microorganisme dintr-un recipient în altul, lucrare ce se execută în zona sterilă de protecţie din jurul flăcării becului de gaz.

Sticlăria cel mai des utilizată în laboratorul de microbiologie constă în eprubete de diferite dimensiuni, flacoane Erlenmeyer, plăci Petri, pipete Pasteur şi pipete gradate. În ultima perioadă sunt din ce în ce mai mult utilizate recipientele şi pipetele din plastic, de unică folosinţă. Pentru prelevarea şi inocularea culturilor se utilizează ansa sau firul metalic, fabricate din nicrom. Ustensilele de etalare permit repartizarea uniformă a inoculului pe suprafaţa mediilor solidificate şi pot fi fabricate prin îndoirea unui tub sau a unei baghete din sticlă. În afara acestor ustensile curente de lucru, mai pot fi întrebuinţate o serie de alte instrumente, în funcţie de operaţia efectuată.

Laboratorul de microbiologie trebuie să aibă în dotare următoarele aparate şi echipamente:

• robinet cu apă caldă şi rece, de preferinţă acţionat cu piciorul;

• hotă cu flux laminar sau nişă sterilizabilă, indispensabilă lucrărilor de microbiologie

• bec de gaz tip Bunsen pentru lucrul în zona sterilă din jurul flăcării cu con albastru şi pentru sterilizarea ansei

• etuvă pentru sterilizarea sticlăriei

• termostat bacteriologic pentru incubarea culturilor

• autoclav pentru sterilizarea mediilor de cultură şi pentru decontaminarea obiectelor

• baie de apă termostatată

• frigidere pentru conservarea mediilor şi a culturilor

• balanţe

• pH-metru

• microscoape

Pregătirea şi sterilizarea materialului în vederea utilizării în laboratorul de microbiologie este o operaţie deosebit de importantă deoarece exactitatea rezultatelor precum şi reuşita desfăşurării proceselor microbiologice depind în mare măsură de rigurozitatea cu care se efectuează.

Principalele operaţii de pregătire a sticlăriei de laborator sunt:

- spălarea

- uscarea

- executarea dopurilor şi ambalarea - recipientele pot fi pregătite cu dop din vată hidrofobă pentru a nu păstra umezeala după autoclavare. Pentru eprubete se execută dopuri de vată hidrofobă, astfel încât să poată fi extrase uşor în timpul inoculării, iar densitatea materialului să asigure sterilitatea. Eprubetele se introduc in coşul de sârmă şi se acoperă cu hârtie.