Analize fizico-chimice

1. Introducere

În topul celor mai sănătoase fructe, grapefruitul este campion, un “adevărat soare” în constelaţia remediilor naturale, o “vedetă” a stilului de viată sănătos, atribuindu-i-se proprietăţi curative remarcabile, fapt pentru care se bucură de atenţia binemeritată a cercetătorilor.

Ulterior, au fost realizate studii experimentale pe animale de laborator şi numeroase studii clinice care demonstrează existenţa interacţiunilor sucului de grapefruit cu medicamente din diferite clase terapeutice.

Interacţiunile medicamentoase reprezintă o sursă majoră de accidente sau de eşecuri terapeutice, mai ales în situaţii de polimedicaţie

Alimentele, prezente simultan în tubul digestiv, pot influenţa eficacitatea principiilor active medicamentoase prin diminuarea sau, din contră, intensificarea efectelor terapeutice. Interacţiunile privesc, adesea, absorbţia medicamentelor de-a lungul tubului digestiv, dar anumiţi nutrienţi modifică metabolismul şi eliminarea medicamentelor. Alimentele pot influenţa atât viteza de absorbţie cât şi biodisponibilitatea unui medicament.

Furanocumarinele, un grup de compuşi din sucul de grapefruit au demonstrat acţiune de inhibare specifică a CYP3A4 (Citocromul P450 3A4 - este o enzimă importantă din organism, a fost găsit mai ales în ficat și în intestine; scopul său este de a oxida mici molecule organice străine (xenobioticelor), cum ar fi toxinele sau medicamente, astfel încât acestea să poată fi eliminate din organism.).

Bergamotina este furanocumarina majoritară în sucul de grapefruit; metabolitul sau, dihidroxibergamotina, precum şi alte patru componente cu structuri asemănătoare sunt potenţial inhibitoare ale P-glicoproteinei, când sunt prezente simultan în aliment.

Cantitatea de compuşi bioactivi implicaţi în producerea interacţiunii poate afecta amploarea, durata şi chiar mecanismul acestui proces de interacţiune aliment-medicament.

2. Conţinutul proiectului

2.1. Determinarea bergamotinei din sucuri de fructe

HPLC- High Performance Liquid Chromatography (Cromatografie lichidă de înaltă performanță): metodă de analiză calitativă utilizată în biochimie și chimie analitică pentru separarea, identificarea și cuantificarea compușilor. HPLC folosește o coloană încărcată cu diferite materiale (faza staționară), o pompă ce împinge faza(ele) mobilă(e) prin coloana și un detector care arată timpurile de retenție ale moleculelor. Timpul de retenție depinde de interacțiunea dintre faza staționară, moleculele de analizat și solvenții utilizați.

MS- Mass Spectrometry (Spectrometria de masă): utilizată pentru determinarea masei moleculare, compoziția substanței, are la bază analizarea moleculei prin ionizare și observarea comportamentului în câmpul electric sau magnetic.

Materiale şi metode :

Fructele din care s-au preparat sucurile (grapefruit, portocale, mandarine, pere, mere) au fost achizitionate din supermarket. Sucurile au fost preparate în laborator din fructul integral, respectiv din pulpa fructului, cu ajutorul storcatorului de fructe.

În timpul depozitării sucurile de fructe separă două fracţiuni: un supernatant şi precipitatul corespunzător. În literatura de specialitate este semnalată concentraţia diferită a bergamotinei în cele două fracţiuni. Determinarea concentraţiilor bergamotinei s-a realizat prin metoda HPLC pentru fiecare dintre cele două fracţiuni obşinute din sucul integral de grapefruit roşu, alb, respectiv roz. Separarea celor două fracţiuni s-a realizat prin centrifugarea sucului la 10.000 rpm, timp de 20 de minute.

Pentru analiza HPLC a sucului integral, acesta a fost diluat (1:1) cu metanol, menţinut 30 de minute la temperatura camerei şi centrifugat la 3000 rpm timp de 15 minute. Lichidul supernatant se injecteaza în sistemul cromatografic.