Metode Enzimatice și Imunologice

Determinari analitice realizate cu ajutorul enzimelor

Determinarea glucozei

- trusa creata pentru glucoza.

-

ABTS – compus cromogen

Compus colorat – spectrofotometric 610 mm

[glucoza]=[compus colorat]

- D glucoza + ATP glucoza6P+ADP

glucoza6P + 6P gluconat + NADP H +

NADP – se dozeaza spectrofotometric 340 mm

[glucoza]=[NADPH]

- zaharoza D glucoza + D fructoza

Determinarea glucozei se face ca mai sus.

La determinarea de zaharoza poate sa apara problema prezentei simultane in proba de analizat a zaharozei si glucozei ceea ce poate determina o apreciere eronata a cantitatii de zaharoza.

Determinarea lactozei

Lactoza + H2O D glucoza + D galactoza

D galactoza + Ac. galactonic + NADH +

NADH – dozare spectrofotometrica 340 mm

Sunt situatii in care matricea nu permite eliberarea completa a substantei de analizat.

Pentru a verifica daca dozarea se face corect se obisnuieste ca in proba de analizat sa se adauge o cantitate cunoscuta din substanta de analizat , sa se faca determinarea respective si apoi sa se determine in ce masura a fost dozata substanta introdusa in cantitatea cunoscuta.

Se utilizeaza material de referinta fiind probe care contin anumiti analiti in concentratii bine determinate.

Materialele de referinta sunt introduse in analiza prin probele obisnuite.

Determinarea alcoolului etilic

Putem face determinarea in sucuri de fructe , gemuri unde nu trebuie sa fie prezent alcoolul etilic dar sunt situatii in care poate fi pus in prezenta lui.De asemenea alcoolul etilic nu trebuie sa fie prezent in bauturile declarate bauturi fara alcool.

Alcool etilic + Aldehida acetica + NADH +

Aldehida acetica + Ac.Acetic+NADH+

[Alc. Etilic]=

Determinarea acizilor organici

Acidul lactic se determina in produsele lactate dar pe acelasi principiu functioneaza determinarea de acid lactic de la pacienti ca modalitate de supraveghere a starii de sanatate sau a efortului facut.

L-Ac. Lactic+ Piruvat+

Piruvat+L glutamat L-alanina + oxoglutarat

Determinarea acidului ascorbic

Se gaseste in mod natural in fructe in special in citrice , in struguri iar in legume il intalnim la rosii , spanac , cartofi.

In industria alimentara pe langa acidul ascorbic prezent in mod natural in unele produse se utilizeaza ca aditiv in calitate de antioxidant.

E300 acid ascorbic

E301,302,303 sarurile lui.

Se oxideaza foarte usor si are capacitatea de a retine radicalii liberi.

Determinarea lui se realizeaza in prezenta unui purtator de electron abreviat PMS in prezenta unei sari de tetrazoliu MMT.

Ac.ascorbic+ +MTT Dehidroascorbat+MTT formazan+

MTT-dozare spectrofotometric la 578 mm