Lucrări practice microbiologie

1. INTRODUCERE

“În domeniul observaţiei, hazardul nu

favorizeazå decât minţile pregătite”

- L. Pasteur

Existenţa lumii microbiene a rămas necunoscută până la inventarea microscopului la începutul secolului al XVII-lea. Antonie van Leeuwenhoek (1632 - 1723), savant olandez, a fost primul care a observat cu ajutorul unui “microscop” rudimentar fabricat de el însuşi, particulele invizibile cu ochiul liber: sfere, bastonaşe, spirili.

Microorganismele au fost descoperite în sec. al XIX-lea şi clasificate în regnul vegetal. Haeckel (1866) propune crearea regnului Protista, alături de cel animal şi vegetal. Astfel, el regrupează organismele unicelulare sau pluricelulare care nu formează ţesuturi diferenţiate în: alge, ciuperci, protozoare şi bacterii.

În 1978, fiinţele vii au fost clasificate în 5 regnuri, după Whittaker şi Margulis: (Prokaryotae, Protoctista, Fungi, Plantae şi Animalia), urmând ca , odată cu dezvoltarea biologiei moleculare, C. Woese să propună, în 1990, o nouă clasificare în trei “domenii”: Archaea, Bacteria şi Eucarya.

Microbiologia este ştiinţa care se ocupă cu studiul microorganismelor, fiinţe unicelulare sau multicelulare microscopice. Această ştiinţă biologică este scindată în mai multe specialităţi: micologie, bacteriologie, virologie, algologie, protozoologie.

2. LABORATORUL DE MICROBIOLOGIE - GENERALITĂŢI

Laboratorul de microbiologie trebuie să cuprindă două compartimente:

- o sală de pregătire a mediilor şi obiectelor de lucru şi de decontaminare, conţinând mese, un autoclav, o etuvă, un congelator şi un frigider (care va fi utilizat şi pentru păstrarea tulpinilor microbiene). Tot aici se poate stoca sticlăria, mediile de cultură precum şi reactivii.

- o sală de lucrări propriu-zise, de manipulare a culturilor microbiene, la adăpost de curenţii de aer, dotată cu mese cu suprafaţă netedă, rezistentă, impermeabilă, cu conducte de gaz şi prize electrice, un sistem de vid şi de aer comprimat şi o hotă sterilizabilă, cu radiaţii ultraviolete (eventual o hotă cu flux laminar). În măsura în care este posibil, în legătură cu această sală, ar trebui să existe anexe prevăzute cu termostate la diferite temperaturi ( 250C, 300C, 370C, 440C, 550C).

Manipulările de culturi microbiene sau de produse susceptibile să conţină microorganisme se efectuează ţinând cont de unele tehnici particulare prin care să se evite cele două tipuri de contaminare:

1. contaminarea culturii sau a produsului ce trebuie analizat datorită personalului sau mediului inconjurător;

2. contaminarea personalului sau a mediului înconjurător de către microorganismele studiate.

In laboratorul de microbiologie, operaţia de bază este transferul de microorganisme dintr-un recipient în altul, lucrare ce se execută în zona sterilă de protecţie din jurul flăcării becului de gaz.

Sticlăria cel mai des utilizată în laboratorul de microbiologie constă în eprubete de diferite dimensiuni, flacoane Erlenmeyer, plăci Petri, pipete Pasteur şi pipete gradate. În ultima perioadă sunt din ce în ce mai mult utilizate recipientele şi pipetele din plastic, de unică folosinţă. Pentru prelevarea şi inocularea culturilor se utilizează ansa sau firul metalic, fabricate din nicrom. Ustensilele de etalare permit repartizarea uniformă a inoculului pe suprafaţa mediilor solidificate şi pot fi fabricate prin îndoirea unui tub sau a unei baghete din sticlă. În afara acestor ustensile curente de lucru, mai pot fi întrebuinţate o serie de alte instrumente, în funcţie de operaţia efectuată.

Laboratorul de microbiologie trebuie să aibă în dotare următoarele aparate şi echipamente:

- robinet cu apă caldă şi rece, de preferinţă acţionat cu piciorul;

- hotă cu flux laminar sau nişă sterilizabilă, indispensabilă lucrărilor de microbiologie

- bec de gaz tip Bunsen pentru lucrul în zona sterilă din jurul flăcării cu con albastru şi pentru sterilizarea ansei

- etuvă pentru sterilizarea sticlăriei

- termostat bacteriologic pentru incubarea culturilor

- autoclav pentru sterilizarea mediilor de cultură şi pentru decontaminarea obiectelor

- baie de apă termostatată

- frigidere pentru conservarea mediilor şi a culturilor

- balanţe

- pH-metru

- microscoape