Subiecte Biochimie

Definiti :1 unitate de activitate enzimatica.

Unitatea de activitate enzimatica (U) reprezinta cantitatea de enzima ce catalizeaza transformarea a 1 micromol (1μM) de substrat/min/litru in conditii experimentale definite. In mod curent activitatea enzimatica se exprima si ca miliunitati per ml (mU/ml).

Activitatea enzimatica specifica reprezinta numarul de unitati enzimatice raportate la 1mg de proteina (U/mg).

Activitatea enzimatica moleculara reprezinta numarul de molecule de substrat transformate de catre o molecula de enzima in timp de 1 minut.

Influenta concentratiei substratului asupra vitezei reactiei enzimatice.

La concentratii relativ mari de substrat viteza unei reactii enzimatice variaza liniar cu cantitatea de enzime. In acest sens se va urmari viteza reactiei de hidroliza a ureei sub actiunea ureazei incubandu-se o cantitate constanta de substrat cu cantitati variabile de enzima.

Principiul metodei:

O solutie de uree, intr-un tampon de pH=7, este incubata cu ureaza. Dupa un interval de timp (25 de minute) reactia enzimatica este blocata prin inhibarea enzimei cu cationi de Hg2+ (care se combina cu gruparile –SH din enzima). Se masoara cantitatea de amoniac prin titrare cu o solutie de HCl.

Ecuatia matematica intre viteza de reactie enzimatica, v, viteza maxima de reactie, vmax, concentratia substratului [S] si km se numeste ecuatia Michaelis-Menten:

v=vmax•[S]/[S]+km

Constanta Michaelis si semnificatia acesteia.

Acea cantitate de substrat pentru care viteza de reactie este jumatate din viteza maxima de reactie se numeste constanta Michaelis (km).

km=moli/litru

Constanta Michaelis exprima afinitatea enzimei fata de substratul sau de reactie. O valoare mica a lui km indica o afinitate mare a enzimei pentru substratul sau de reactie si reciproc; o valoare mare a lui km indica o afinitate mica a enzimei pentru substratul sau de reactie.

Semnificatia diagnosticului enzimatic.

Dozarea in ser a activitatii unor enzime provenite din celulele organului afectat dobandeste o semnificatie clinica cu atat mai mare cu cat raporturile intre activitatile anumitor enzime prezinta valori care se abat mult de la nivelurile considerate ca fiind normale.

In functie de localizarea leziunii valoarea activitatii enzimelor serice provenite din organul respectiv ca si a unor raporturi intre activitatea anumitor enzime pot furniza date utile pentru clinica in legatura cu organul afectat, cu gradul de intindere si evolutie a leziunii de organ.

Cresterea semnificativa a activitatii unor enzime serice reflecta o leziune intinsa, fapt ce denota o distructie celulara pronuntata.

Principiul metodei utilizate pentru determinarea activitatii GOT/GPT

Se incubeaza substrat GOT (glutamatoxalacetat transaminaza) sau GPT (glutamatpiruvat transaminaza) cu ser nehemolizat. Acidul piruvic eliberat in reactie reactioneaza cu 2,4-dinitrofenilhidraniza in mediu bazic formand dinitrofenilhidrazona colorata in rosu-caramiziu. Intensitatea culorii este proportionala cu activitatea enzimatica din serul studiat. Se estimeaza spectrofotometric. Pentru a nu interfera in masurarea activitatii, acidul α-cetoglutaric se adauga in cantitati mici, iar masurarea se face la 560nm unde fenilhidrazona acidului α-cetoglutaric absoarbe slab.

Semnificatia diagnostica a activitatii fosfatazei alcaline serice

Valori normale: copii=38-138UI/l; adulti=20-48UI/l; femei insarcinate (ultimul trimestru)=28-115UI/l

Valori crescute se intalnesc in:

a)afectiuni osoase cu activitate osteoblastica intensa:

-boala Paget; tumori sau metastaze osteoblastice; hiperparatiroidism; rahitism; osteomalacie;

b)afectiuni hepato-biliare: colestaza intra- si extrahepatica; forma colestazica a hepatitei virale acute; granulomatoza hepatica; neoplasm; ciroza;

c)hiperfosfatazemie familiala, benigna, extrem de rara;

d)dupa administrarea prelungita a unor medicamente (droguri): antiepileptice; anticoagulante;

Valori scazute se intalnesc in: hipofosfatazemie, nanism, hipotiroidism, anemie pernicinoasa, deficit de vitamina C.