Metode Analitice Realizare cu Ajutorul Enzimelor

Introducere

Scopul prezentului studiu a constat în caracterizarea unor produse alimentare, cum ar fi uleiuri vegetale, sucuri de fructe şi cereale, folosind cromatografia HPLC precum şi metode spectroscopice FTIR/Raman, în vederea determinării calităţii şi autenticităţii acestora.

Biomarkerii selectaţi pentru evidenţierea calităţii şi autenticităţii acestor produse alimentare sunt în principal componente minore, provenind din plante (numite fitochimicale). Astfel, obiectivele sunt legate de metoda analitică, de tipul alimentului şi markerul de calitate /autenticitate utilizat.

Determinarea calităţii şi autenticităţii sucurilor de fructe reprezintă un domeniu de cercetare aplicată cu impact relevant în industrie, siguranţa alimentară şi protecţia consumatorului. Spectroscopia FTIR combinată cu metode de analiză statistic multivariată, cum ar fi cele de tip Principal Component Analysis (PCA) sau Partial Least Squares (PLS), au fost utilizate pentru determinarea conţinutului de glucoză, fructoză şi zaharoză în diferite sucuri de fructe, ca markeri de calitate şi autenticitate. Astfel, a fost implementată o procedură rapidă pentru evaluarea carbohidraţilor din sucurile de fructe, confirmând autenticitatea pentru majoritatea probelor analizate, dar şi adaosul de zaharoză în unele probe.

Metode enzimatice imunologice.

Determinari analitice realizate cu ajutorul enzimelor.

Determinarea glucozei

- trusa creata pentru glucoza.

ABTS – compus cromogen

Compus colorat – spectrofotometric 610 mm

[glucoza]=[compus colorat]

* D glucoza + ATP glucoza6P+ADP

glucoza6P + 6P gluconat + NADP H +

NADP – se dozeaza spectrofotometric 340 mm

[glucoza]=[NADPH]

* zaharoza D glucoza + D fructoza

Determinarea glucozei se face ca mai sus.

La determinarea de zaharoza poate sa apara problema prezentei simultane in proba de analizat a zaharozei si glucozei ceea ce poate determina o apreciere eronata a cantitatii de zaharoza.

CUANTIFICAREA GLUCOZEI, FRUCTOZEI ŞI ZAHAROZEI ÎN SUCURI DE MERE UTILIZÂND SPECTROSCOPIA FTIR CUPLATĂ CU METODE CHEMOMETRICE

MATERIALE ŞI METODE

Probe. Un număr de 11 sucuri de mere au fost achiziţionate de la diferite supermarket-uri. Sucuri de mere autentice (100% naturale) au fost obţinute prin stoarcerea unui măr de tip Golden Delicious şi a unui măr de tip Jonagold. Cele 13 probe sunt descrise în Tabelul I, conform cu etichetarea acestora.

Tabel I

Notaţia Şi descrierea probelor de sucuri folosite în analiza FTIR

Nr. Probă Descriere probă Provenienţă

1 A1_100% suc de mere 100%, măr verde comercial

2 A2_100% suc de mere 100% comercial

3 A3_100% suc de mere 100% comercial

4 A4_100% suc de mere 100% comercial

5 A5_100% suc de mere 100% comercial

6 A6t_100% suc de mere 100%, tulbure comercial

7 A7t_100% suc de mere 100%, tulbure comercial

8 A8t_100% suc de mere 100%, tulbure comercial

9 A9c_100% suc de mere 100%, din concentrat comercial

10 A10c_100% suc de mere 100%, din concentrat comercial

11 A11_50% suc de mere 50% comercial

12 Golden suc autentic stors din măr Golden Delicious

13 Jonagold suc autentic stors din măr Jonagold

Pentru prepararea a 24 amestecuri de glucoză, fructoză şi zaharoză (codificate g_f_s) au fost folosite soluţii standard de diferite concentraţii (g/100 ml) de glucoză (g) (1.0, 1.25, 2.0, 2.5, 4.0 şi 5), fructoză (f) (3.25, 3.5, 6.0, 6.5, 7.0, 9.0 şi 13.0) şi zaharoză (e) (0.75, 1.0, 1.5, 2.0, 3.0, 4.0). Soluţiile standard pregătite au acoperit intervalele minime şi maxime de concentraţie, reprezentative pentru probele naturale şi au fost utilizate pentru dezvoltarea modelului de calibrare.