Determinarea Constantei de Legare a Ansă de Bsa Prin Spectroscopie de Fluorescență

Domeniu: Fizică

Conține 1 fișier: docx

Pagini : 17 în total

Cuvinte : 2091

Mărime: 1.42MB (arhivat)

Publicat de: Barbu Ardeleanu

Puncte necesare: 8

Descarcă acum

Introducere.

1. Spectroscopie de fluorescent.

In spectroscopia de fluorescenta au loc doua preocese. Primul, este reprezentat de absorbtia unui foton, ce duce electronii intr-o stare excitata, si al doilea, este intoarcerea electronului excitat in starea fundamental printr-o tranzitie radiativa. Deoarece o parte din energia initiala a luminii absorbite se pierde datorita tranzitiilor dintre nivelele energetice de vibratie, energia luminii emise are o lungime de unda mai mare.

Figura 1 Diagrama Jablonski.

Spectroscopia de fluorescenta poate fi aplicata pentru o gama larga de probleme din chimie si biologie. Masuratorile pot oferi informatii despre foarte multe procese moleculare, incluzand interanctii dintre solventii moleculari cu fluorofori, difuzia rotationala a biomoleculelor, schimbari conformationale si interactii de legare. Datorita tehnologiei avansate, prin fluorescenta se va putea obtine imagini celulare si detectia unei singure molecule.

2. ANSA- Propietati fizice si chimice

ANS-ul, 1-anilo-8-naphthalenesulfonic acid hemimagnesium salt hydrate, este o proba fluorescenta ce este foarte sensibila la polaritatea solventului si nu este fluorescenta in apa (randamentul cuantic=0.004), insa emisia creste semnificativ in medii hidrofobice. De asemenea, este folosit in: monitorizarea schimbarilor conformationale ale proteinelor prin legarea la regiunile hidrofobice ale acestora, in investigarea proceselor de excitatie si aspectele structurale ale membranelor celulare ale fotoreceptorilor si pentru a proba structura lipoproteinelor ce au densitate scazuta si ridicata. Formula moleculara : C16H16N2O3S si masa moleculara este de 316.4 Da. Punctul de topire este situate intre 242-2440C si are o culoare verde-inchis.

Figura 2. 1-anilino-8-naphalene sulfonate, ammonium salt

3. BSA- Propietati fizice si chimice

Albumina serica este cea mai abundenta proteina din plasma, ea fiind cunoscuta pentru capacitatile sale exceptionale de legarea a liganzilor. Albumina serica de bovina (BSA) este formata din 20 de amino acizi esentiali intr-o structura ce contine 538 de unitati si formeaza subdomenii prin cuplarea a 17 legaturi disulfidice. Masa moleculara, calculata prin diferite tehnici, variaza intre 66411 si 66700 Da, cea mai buna valoare pentru solutii fiind 66500 Da. BSA prezinta un continut mare de structuri helicoidale (aproximativ 67%) si e alcatuit din trei domenii α-helix omogene (I, II, III), fiecare domeniu avand alte doua subdomenii (A,B). De asemenea prezinta 2 reziduri de Triptofan (Trp 135 si Trp 214). BSA-ul contine in structura sa 54% α-helix si 18% β. Principala functie este aceea de transport a unei game variate de acizi grasi, hormono, ioni metalici si metaboliti.

M. Moller si A. Denicola, Protein Tryptophan Accessibillity Studied by Fluorescence Quenching, Biochemestry and Molecular Biology Education, 2002, vol 30: 175-178

E. Danielt and G. Weber, Cooperative Effects in Binding by Bovine Serum Albumin. I. The Binding of 1 - Aniline- 8- naphthalenesulfonate. Fluorimetric Titrations, Biochemistry, 1966, vol 5:1900–1907.

R. A. Curvale, Buffer Capacity of Bovine Serum Albumin (BSA), The Journal of the Argentine Chemical Society, 2009, vol. 97: 174-180.

D. M. Togashi and A. G. Ryder, A Fluorescence Analysis of ANS Bound to Bovine Serum Albumin: Binding Properties Revisited by Using Energy Transfer, J Fluoresc , 2008, vol 18:519–526.

D. Matulis and R. Lovrien, 1-Anilino-8-Naphthalene Sulfonate Anion-Protein Binding Depends Primarily on Ion Pair Formation, Biophysical Journal, 1988, vol 74: 422–429.

A. Marty, M. Boiret, and M.l Deumle, How to Illustrate Ligand-Protein Binding in a Class Experiment. An Elementary Fluorescent Assay, Journal of Chemical Education, 1986, vol 63.