Dializă

Dializa este una din cele mai vechi tehnici folosite pentru indepartarea substantelor dizolvate cu masa moleculara mica cum ar fi sarurile dintr-un extract proteic.

Principiul metodei: Dializa unei solutii de albus de ou fata de apa distilata presupune trecerea ionilor de sare prin membrana sacului de dializa in mediul de dializa.Moleculele proteinelor raman in sacul de dializa deoarece datorita marimii lor nu pot strabate porii membranei de dializa.Insa, in acelasi timp cu desalinizarea are loc intrarea moleculelor de apa in sacul de dializa realizandu-se si o diluare a extractului proteic.

Aplicabilitatea metodei: Metoda poate fi folosita pentru schimbarea tamponului sau solventului in care este realizat extractul proteic, sau este folosita pentru indepartarea substantelor dizolvate cu masa moleculara mica cum ar fi sarurile dintr-un extract proteic.

Mod de lucru:

A.Prepararea solutiilor si a sacului de dializa

Se folosesc pentru dializa 7g din solutia proteica din albus preparata in lucrarea anterioara (Precipitarea proteinelor din albus de ou).

Pentru a prepara sacul de dializa , se taie din rola uscata o bucata cu un volum aproape dublu fata de volumul de extract ce urmeaza sa fie supus dializei.Se inmoaie aproximativ 15 minute in apa distilata, apoi se inoada la unul din capete.Se intoduce solutia de albus pregatita pentru dializa, se inoada si la capatul liber si se introduce in vasul de dializa in care s-a turnat in prealabil aproximativ 600mL de apa distilata.

In vederea realizarii reactiilor de identificare se prepara o solutie de sulfat de cupru 1% prin dizolvarea a 0.25g sulfat de cupru cristalizat in aproximativ 10mL de apa distilata si se completeaza la volum total de 25mL intr-un balon cotat.

In acelasi scop se realizeaza o solutie de hidroxid de sodiu in 40% prin dizolvarea a 10 g hidroxid de sodiu in aproximativ 10 mL apa distilata si se aduce la semn cu apa distilata intr-un balon cotat (25 mL).

B.Efectuarea dializei

Sacul de dializa cu extract proteic se imerseaza in apa distilata din vasul de dializa .

In vas este necesara agitarea pentru a facilita difuzia si a preveni crearea unor gradienti mari de concentratie.