Citometria în flux

Citometria de flux este o metoda moderna,complexa si performanta de analiza celulara,ce asigura obtinerea unor masuratori rapide cu rezolutii superioare metodelor clasice, separate pentru fiecare celula,incluzand acizii nucleici,complexele imune,cromozomii sau organitele celulare.

Citometria in flux are la baza o abordare tehnica relativ noua,ce permite determinarea simultana a mai multor parametri fizici si chimici corespunzatoare unei singure celule aflate in miscare intr-un curent lichid=> masurarea proprietatilor celulei intr-un sistem fluid.

Aceasta metoda are un numar mare de aplicatii in diverse specialitati medicale dar si chirurgicale: imunologie, oncologie, hematologie, neonatologie, fertilizare in vitro, genetica.

Exemple de boli unde aceasta metoda este utila sunt : imunodeficientele, leucemiile, limfoamele, unele tumori solide, bolile autoimune.

Un fascicul de lumină (lumina laser, de obicei) dintr-o singură lungime de undă este directionat pe un flux de lichid concentrat hidrodinamic. O serie de detectori sunt îndreptati înspre punctul în care fluxul trece prin fasciculul de lumină: unul, în conformitate cu fasciculul de lumină cu dispersia pe directia înainte și fasciculul de lumină cu dispersia perpendiculară.

Fiecare particulă de dimensiuni de la 0.2 - 150 micrometri ce trece prin fasciculul de lumină și substantele chimice fluorescente găsite în particule sau atașate de particule pot fi excitate să emită lumină la o lungime de undă mai mare decât sursa de lumină. Această combinatie de lumină fluorescentă și lumină dispersată este preluată de către detectoare prin analizarea fluctuatiilor de luminozitate, la fiecare detector, după care este posibilă obtinerea diferitelor tipuri de informatii despre structura fizică și chimică a fiecărei particule individuale.

Prepararea suspensiei de celule

Marcarea celulelor

Achiziția datelor

Stocarea datelor

Interpretarea datelor

Îmbunătățirea cunoștințelor noastre în biologia celulară este în mare măsură legată de utilizarea de noi instrumente în citologia cantitativă. Dintre acestea, citometria de flux a fost dezvoltată cu numeroase aplicații în domeniul imunologiei, inclusiv cercetarea fundamentală și aplicată. De la începuturile sale, a fost asociat cu anticorpi monoclonali pentru a identifica celulele imunocompetente, pentru a cuantifica modificările expresiei determinanților de suprafață, pentru a separa subseturile de celule înainte de a testa proprietățile lor funcționale. Progresele majore obținute utilizând sisteme laser sau mono-duale, fluorescență multicoloră și facilități informatice pentru analiza multiparametrică. Folosind această metodologie a fost posibilă corelarea analizei fazelor ciclului celular și exprimării antigenelor membranei. Au fost dezvoltate aplicații pentru analiza noilor medicamente in vitro, evaluarea tratamentului imunomodulator și pentru investigațiile clinice.