Biosenzori 1

TRADUCTOARE BIOLOGICE. REACŢII ANALITICE DE TIP ENZIMATIC. DETERMINAREA GLUCOZEI PRIN METODA GOD (GLUCOZOXIDAZĂ)

Selectivitatea şi specificitatea biosenzorului este conferită de către traductorul biologic. El asigură detectarea rapidă a moleculelor sau a reacţiilor chimice specifice, ceea ce produce o modificare a structurii biocomponentei sau a mediului de reacţie ce produce stimularea traductorului fizic.

Funcţia de traductor biologic o poate avea: enzimele, microorganismele, ţesuturile, organitele celulare, membrane biologice etc. Acestea sunt imobilizate direct pe suprafaţa traductorului fizic.

Pentru a cunoaşte funcţionarea traductoarelor biologice este necesar să se cunoască enzima şi reacţia enzimatică catalizată de aceasta.

Schema unei reacţii enzimatice este:

S – substratul;

E – enzima;

P – produsul;

SE – complexul substrat – enzimă.

O serie de reacţii enzimatice sunt folosite drept metode analitice pentru determinarea unor compuşi biochimici în laboratoarele clinice, laboratoarele de siguranţa şi calitatea produselor alimentare, laboratoarele pentru controlul calităţii mediului.

Glucozoxidaza (GOD E.C. 1.1.3.4.) este o enzimă izolată din Aspergillus niger (MM 160000) sau Penicillium notatum (MM 152000). Aceasta este o glicoproteină alcătuită din două subunităţi identice unite prin punţi disulfitice. Fiecare subunitatea conţine o moleculă de FAD drept grupare prostetică.

GOD realizează oxidarea  - D –glucozei la D – glucono -  - lactonă şi de aici la acid gluconic în prezenţa unui acceptor de electroni ca oxigenul atmosferic sau hexofericianatul:

Glucozoxidaza (GOD) converteşte glucoza din probă în gluconat. Apa oxigenată produsă în reacţie este descompusă de către peroxidază (POD) şi produce culoare cu fenolul şi 4 – aminoantipirină care se măsoară spectrofotometric la = 505 nm. Absorbanţa este corelată cu concentraţia glucozei din probă.

Determinarea concentraţiei de glucoză este importantă în diagnosticul şi tratamentul tulburărilor metabolismului glucidic.

Reactivi:

R1 Tampon fosfat, pH 7,5 90 mmol / l;

Fenol 0,5 mmol / l;

R2 Glucozoxidază 10000 U/l

Peroxidază 1000 U/l

4 – aminoantipirină 2,5 mmol/l

R3 Standard de glucoză 5,56 mmol/l (1g/l).

Reactivi sunt stabili la temperatura cuprinsă între 2 – 8 0C şi la păstrare la întuneric.

Mod de lucru:

Blank Standard Proba

Reactiv R2 2 ml 2 ml 2 ml

Apă distilată 20 l - -

Standard - 20 l -

Proba - - 20 l

Termostatare 10 minute la 370 C sau menţinerea 20 minute la temperatura camerei. Absorbanţa se citeşte la spectrofotometrul UV – VIS la = 490 – 520 nm.